首先，作者利用小鼠脾T細(xì)胞，生成了靶向間皮素的Meso-CAR-T細(xì)胞，同時(shí)構(gòu)建了小鼠腫瘤模型，并從腫瘤組織中純化出小型細(xì)胞外囊泡。然后，作者使用基于抗體的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)——逆相蛋白質(zhì)陣列（RPPA）分析了其中蛋白質(zhì)的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Meso-CAR-T細(xì)胞處理組中，PD-L1的水平明顯更高。同時(shí)，RPPA分析發(fā)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞中與T細(xì)胞活化相關(guān)的蛋白和T細(xì)胞存活相關(guān)的蛋白顯著下調(diào)，而與T細(xì)胞衰竭相關(guān)的蛋白和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)相關(guān)的蛋白被上調(diào)，這表明外泌體對(duì)CAR-T細(xì)胞具有抑制作用。作者在此進(jìn)一步的證明了外泌體對(duì)CAR-T細(xì)胞毒性作用、增殖和功能的抑制作用。

隨后，作者研究了腫瘤抗原是否參與腫瘤源性外泌體與CAR-T細(xì)胞的關(guān)聯(lián)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腫瘤源性外泌體與Meso-CAR-T細(xì)胞的結(jié)合水平明顯高于對(duì)照，用抗間皮素抗體預(yù)處理外泌體可顯著抑制其結(jié)合。這些數(shù)據(jù)表明，外泌體上的抗原與它們匹配的CAR相互作用，這使得外泌體與CAR-T細(xì)胞優(yōu)先結(jié)合。間皮素外泌體對(duì)Meso-CAR-T細(xì)胞的抑制作用明顯更強(qiáng)，抗間皮素抗體顯著減弱了外泌體對(duì)腫瘤殺傷、增殖和功能的抑制作用?？偟膩?lái)說(shuō)，CAR-T靶向抗原介導(dǎo)的相互作用增強(qiáng)了外泌體對(duì)實(shí)體瘤中CAR-T細(xì)胞的抑制作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明間皮素是腫瘤外泌體介導(dǎo)的Meso-CAR-T細(xì)胞體內(nèi)抑制的關(guān)鍵所在。

 

化學(xué)抑制劑GW4869被用于體外和體內(nèi)的外泌體抑制劑。因此，作者將Meso-CAR-T細(xì)胞與GW4869聯(lián)合使用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，并顯著延長(zhǎng)小鼠的生存期，同時(shí)顯著增加了Meso-CAR-T細(xì)胞在腫瘤中的浸潤(rùn)并增強(qiáng)了其活化。內(nèi)源性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的抗腫瘤功能有助于CAR-T細(xì)胞治療。在本研究中，流式細(xì)胞術(shù)分析顯示GW4869增加了內(nèi)源性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞向腫瘤部位的浸潤(rùn)。與單獨(dú)使用Meso-CAR-T或GW4869相比，Meso-CAR-T和GW4869聯(lián)合使用增加了CD8陽(yáng)性T細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)，同時(shí)也導(dǎo)致脾臟和淋巴結(jié)內(nèi)源性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的激活。綜上所述，這些結(jié)果表明Meso-CAR-T和外泌體抑制劑聯(lián)合使用可提高CAR-T細(xì)胞療效以及內(nèi)源性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的抗腫瘤活性。

這些研究結(jié)果提示了實(shí)體腫瘤抵抗CAR-T細(xì)胞的新機(jī)制，并暗示腫瘤外泌體是CAR-T細(xì)胞治療的潛在治療靶點(diǎn)。靶向外泌體分泌可能為改善實(shí)體瘤CAR-T細(xì)胞治療提供新的策略。進(jìn)一步研究外泌體的分子組成及其與CAR-T細(xì)胞的關(guān)系，更好地理解CAR-T細(xì)胞在實(shí)體瘤中的功能，指導(dǎo)開發(fā)新的策略，重塑腫瘤微環(huán)境和抗腫瘤免疫，從而有效地治療癌癥患者。

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