慢病毒載體
慢病毒載體系統(tǒng)是一種能非常高效的把外源基因穩(wěn)定整合到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的載體工具。除了常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染外,目前該系統(tǒng)也是把外源基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的最常用方法之一。由于具有目的基因和啟動(dòng)子選擇的靈活性以及轉(zhuǎn)染細(xì)胞類(lèi)型的廣泛性?xún)纱筇攸c(diǎn),使得慢病毒載體系統(tǒng)成為倍受歡迎的外源基因表達(dá)系統(tǒng)。
慢病毒載體來(lái)源于人類(lèi)免疫缺陷病毒HIV,屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族。野生型慢病毒基因組是線(xiàn)性雙正鏈RNA。
慢病毒重組載體構(gòu)建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染進(jìn)入包裝細(xì)胞。在包裝細(xì)胞中,位于兩個(gè)長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)之間的DNA片段會(huì)被轉(zhuǎn)錄成RNA,由輔助質(zhì)粒表達(dá)的病毒蛋白將其包裝形成病毒顆粒。包裝后的活體病毒將會(huì)被釋放到上清液中,可以直接收集或進(jìn)一步濃縮病毒轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞。
當(dāng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞時(shí),釋放到宿主細(xì)胞中的病毒RNA借助逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA,然后隨機(jī)整合進(jìn)宿主細(xì)胞的基因組中。在病毒載體中,位于兩個(gè)LTR的DNA片段和病毒基因組都會(huì)穩(wěn)定整合到靶細(xì)胞的基因組中。
關(guān)于慢病毒基因表達(dá)載體的更多信息,請(qǐng)參考以下文獻(xiàn)。
參考文獻(xiàn) | 主題 |
---|---|
J Virol. 72:8463 (1998) | The 3rd generation lentivirus vectors |
J Virol. 72:9873 (1998) | Self-inactivating lentivirus vectors |
Science. 272:263 (1996) | Transduction of non-dividing cells by lentivirus vectors |
Curr Gene Ther. 5:387 (2005) | Tropism of lentiviral vectors |
J Virol. 77:4685 (2003) | Impact of cPPT to lentivirus vector transduction |
J Virol. 73:2886 (1999) | WPRE enhances the expression of transgenes |
Nat Protoc. 1:241 (2006) | Production and purification of lentiviral vectors |