逆轉(zhuǎn)錄病毒載體
MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒基因表達(dá)載體系統(tǒng)是一種非常高效的,能把外源基因穩(wěn)定整合到哺乳動物細(xì)胞基因組的系統(tǒng),也是在iPS細(xì)胞制備中特別受歡迎的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法。
MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒載體來源于莫洛尼(氏)鼠白血病病毒,屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族,野生型逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組是線性雙正鏈RNA。
MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒重組載體構(gòu)建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染進(jìn)入包裝細(xì)胞。在包裝細(xì)胞中,位于兩個長末端重復(fù)序列(LTRs)之間的DNA片段會被轉(zhuǎn)錄成RNA,由輔助質(zhì)粒表達(dá)的病毒蛋白將其包裝形成病毒顆粒。包裝后的活體病毒將會被釋放到上清液中,可以直接收集或進(jìn)一步濃縮病毒轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞。
當(dāng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞時,釋放到宿主細(xì)胞中的病毒RNA借助逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成DNA,然后隨機(jī)整合進(jìn)宿主細(xì)胞的基因組中。在病毒載體中,位于兩個LTR的DNA片段和病毒基因組都會穩(wěn)定整合到靶細(xì)胞的基因組中。
關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄病毒基因表達(dá)載體的更多信息,請參考以下文獻(xiàn)。
參考文獻(xiàn) | 主題 |
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Nat Protoc. 6:346 (2011) | Tropism of MMLV vectors depends on packaging plasmids |