文獻(xiàn)分享 | 成人外周血和臍帶血來源CAR-NK細(xì)胞的比較
在血液系統(tǒng)癌癥中，急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）和慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）分別是兒童和老年人最常見的白血病。一些患者對化療沒有反應(yīng)，有必要輔以免疫治療，如嵌合抗原受體（CAR）治療，這是治療這些癌癥和B細(xì)胞淋巴瘤的最新和更有效的治療方法之一。但CAR-T細(xì)胞治療仍然存在一些風(fēng)險，包括細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）和神經(jīng)毒性。因此一些科研人員致力于開發(fā)其他CAR治療載體。不同來源的NK細(xì)胞是很有前途的CAR治療載體之一，因為它們在同種異體治療中不會引起移植物抗宿主病（GvHD），并且它們會在沒有事先致敏的情況下迅速攻擊癌細(xì)胞。
來自西班牙的研究人員在Scientific reports上發(fā)表了題為“Adult peripheral blood and umbilical cord blood NK cells are good sources for effective CAR therapy against CD19 positive leukemic cells”的研究文章。該文章主要研究了來自成人外周血（AB）和臍帶血（CB）的NK細(xì)胞對不同靶細(xì)胞的作用，以確定CAR治療的最佳來源。
一、兩種來源NK細(xì)胞的體外擴增、CD19 CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)情況：
通過陰性選擇從AB或CB PBMC中分離出NK細(xì)胞，結(jié)果顯示，從CB中分離得到的NK細(xì)胞多于從AB中分離得到的細(xì)胞。兩周后在CB NK細(xì)胞中觀察到略高的倍數(shù)擴增，但擴增倍數(shù)也較低，2周僅擴增2-3倍。 病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后，細(xì)胞存活率都隨著時間的推移而下降，到第 28天，兩種細(xì)胞來源的CAR-NK存活率都顯著下降到20%左右。在轉(zhuǎn)導(dǎo)效率方面，AB CAR-NK平均轉(zhuǎn)導(dǎo)效率為47.46%，而CB CAR-NK 轉(zhuǎn)導(dǎo)效率為 46.8%。AB和CB NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率之間沒有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異。不管是AB還是CB來源的NK細(xì)胞制備的CAR-NK，深圳細(xì)胞谷制備活率和純度均在90%以上，CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)陽性率高達(dá)60~80%，擴增倍數(shù)可達(dá)上萬倍。
二、兩種來源的CD19-CAR-NK細(xì)胞在遇到表達(dá)CD19的細(xì)胞后引起脫粒
CD107a表面表達(dá)水平與NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性、細(xì)胞因子分泌之間存在直接相關(guān)性。本研究通過對細(xì)胞表面CD107a的表達(dá)來比較CD19 CAR-NK細(xì)胞與非轉(zhuǎn)導(dǎo)NK細(xì)胞對表達(dá)CD19細(xì)胞的脫顆粒能力。實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)導(dǎo)或未轉(zhuǎn)導(dǎo)CD19 CAR的AB和CB NK 細(xì)胞在K562存在下表現(xiàn)出類似的脫顆?；钚?。在CD19陽性細(xì)胞（如Nalm-6、ALL和CLL原代患者腫瘤細(xì)胞）中，AB CD19 CAR-NK細(xì)胞比未轉(zhuǎn)導(dǎo)的AB NK細(xì)胞表現(xiàn)出更高的脫顆粒活性。CB CD19 CAR-NK細(xì)胞比未轉(zhuǎn)導(dǎo)的CB NK細(xì)胞表現(xiàn)出更高的脫顆粒活性。AB CD19 CAR-NK細(xì)胞相較于CB CD19 CAR-NK細(xì)胞CD107a的表達(dá)略高一點。
三、CD19-CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)的NK細(xì)胞更有效地殺死表達(dá)CD19的細(xì)胞
本研究檢測了兩種來源的非轉(zhuǎn)導(dǎo)NK細(xì)胞和CD19 CAR-NK細(xì)胞在不同效應(yīng)靶比下的細(xì)胞毒性活性。AB和CB CAR-NK細(xì)胞比未轉(zhuǎn)導(dǎo)的NK細(xì)胞更好地裂解表達(dá)CD19的靶細(xì)胞。AB CD19 CAR-NK細(xì)胞在10:1比例殺傷Nalm-6的能力、10:1和5:1比例殺傷ALL的能力、1:1比例殺傷CLL細(xì)胞的能力顯著優(yōu)于CB CD19-CAR NK細(xì)胞。另一方面，在10:1和5:1的比例下，CB CD19-CAR NK細(xì)胞裂解CLL細(xì)胞的能力顯著增強?？偨Y(jié)：不管是對ALL還是CLL原代患者腫瘤細(xì)胞，AB來源CD19-CAR NK細(xì)胞殺傷能力明顯優(yōu)于CB來源。
綜上所述，AB CAR-NK細(xì)胞在殺死表達(dá)CD19的靶細(xì)胞方面表現(xiàn)稍好，而CB NK細(xì)胞單位細(xì)胞數(shù)較為穩(wěn)定，可通過不同的白介素刺激提高體外擴增、殺傷活性和存活率。上述實驗說明這兩種來源的CAR-NK細(xì)胞都有其優(yōu)勢，均可以作為CAR治療的替代和更安全的候選細(xì)胞，都適合未來臨床應(yīng)用CAR-NK治療血液病。
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